發布日期：2020-06-24 15:37

病毒的包裝是什么意思它的原理及經驗

病毒的包裝

慢病毒（Lentivirus）的包裝是一種逆轉錄病毒，它可以將靶基因引入一些難以轉染的細胞中，例如原代細胞等。 靶基因隨機整合到宿主基因組中，大大提高了轉染效率，可以在細胞系中穩定表達數代，可以篩選出穩定的轉染細胞系。 由于隨機積分，還存在不確定因素。 一些公司還可以提供靶向整合技術，將靶向基因整合到基因組的特定部分，以確保其病毒的包裝的表達且不會因隨機整合而對細胞造成傷害。  

慢病毒表達載體包含包裝，轉染和穩定整合所需的遺傳信息。 慢病毒包裝質粒可以提供轉錄和包裝RNA到重組假病毒載體中所需的所有輔助蛋白。 為了產生高滴度的病毒顆粒，有必要用表達載體和包裝質粒將細胞共轉染，將病毒包裝在細胞中，將包裝的假病毒顆粒分泌到細胞外培養基中，將上清液通過離心獲得，然后可以直接用于宿主細胞感染。  

慢病毒載體基因組是一種正鏈RNA。 基因組進入細胞后，通過自身的逆轉錄酶逆轉錄成細胞質中的DNA，形成DNA整合前復合體。 進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。 整合的DNA轉錄mRNA，并將其返回細胞質，表達目的蛋白或產生RNAi干擾。 慢病毒的包裝系統由包裝質粒混合物（Mix）和慢病毒載體質粒組成。  

通過胰蛋白酶消化收集細胞，將細胞在35mm培養皿中用適當的完全培養基壓平（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞占據的面積附著在80％的培養皿上）。 培養皿的總面積％以上）。 將細胞在含有5％CO2的37°C培養箱中孵育8-24小時。 當細胞完全粘附于細胞后，即可開始轉染。 轉染前2h病毒的包裝更換培養基（將舊培養基替換為1.5ml完全培養基）。  

在我們的實驗室中，我們包裝了VSV-GPF病毒。 首先，將BHK21細胞分散在6孔板中。 達到90％的豐度后，將它們感染痘病毒，提供T7RNA聚合酶，然后用prVSV-GFP主鏈質粒轉染。 表達4種結構蛋白的pBS-NpBS-P，pBS-G，pBS-L輔助質粒。  48小時后，收集上清液，再次感染健康細胞后可見GFP表達。 請諸神，輔助質粒的目的是什么？ 由于prVSV-GFP骨架質粒帶有N，P，G和L的四個結構基因，因此尚不為人所知，但是如果沒有輔助質粒則無法包裝病毒。

有遺傳物質有外殼蛋白，可以引導兩者進入病毒。 腺病毒只能在293A中擴增，而不能在其他細胞中擴增。 慢病毒載體大多被HIV修飾，可以復制野生型慢病毒的包裝載體，但只能在實驗室中使用。 使其具有復制缺陷。 簡而言之，它是替換或刪除與相應功能有關的相應元素。  

病毒在細胞中進行基因組復制和蛋白質表達，然后自行組裝。 微觀世界中的病毒顆粒很奇怪，并且具有不同的結構。 每種類型的病毒都有其自己的特殊組裝方法。 然而，受科學技術水平的限制，病毒裝配領域的研究工作相對不受歡迎。 如果要實時動態觀察病毒組裝，仍然很難實現。 因此，許多有關病毒的包裝研究仍幾乎是空白。 即使有研究，或者可以確定整個病毒組裝過程，我個人認為可能只有5分之5。  

分段病毒的包裝，例如流感病毒，布尼亞病毒和虎腸病毒。 這些病毒的基因組是分段的。 如何確保在病毒包裝過程中可以將每個基因組包裝到病毒顆粒中。 以具有三段基因組的布尼亞病毒為例，如果只包裝基因組的兩個片段，會形成病毒顆粒嗎？ 但是可以肯定的是，即使可以形成顆粒，病毒仍具有復制缺陷。  

另一個有趣的現象是“空心包裝”（我自己的名字）現象。 兩天前，我讀了一篇有關塞內卡病毒結構生物學的論文。 塞內卡病毒的包裝屬于小RNA病毒家族，很像口蹄疫病毒。 該論文的作者提到，他們發現細胞中10％的病毒不包含基因組，即所謂的病毒樣顆粒（VLP），或者當包裝病毒時，基因組沒有被封閉，它們被 直接形成的。 完整的蛋白質外殼。 作者在文章中說，這個“空心包裝”現在大象的機制尚不清楚。 讓我用一個易于理解的詞來概括它：盡管該病毒的包裝看起來很嚴密有序，但有時還是會漏掉。